Car-T细胞治疗

Car-T疗法全称嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。该疗法通过基因重组技术，获得表达嵌合抗原受体（Cars) 的T细胞，再经纯化、体外扩增和活化，将Car-T细胞输注回患者体内，使其能特异性识别、结合肿瘤细胞表面抗原，行使杀灭肿瘤细胞的功能。而Car-T疗法核心则在于改造人体免疫T细胞，从而增强免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。

Car-T作为一个新的治疗手段，研发和生产工艺及质控方法有多也在探索和优化。伯乐的产品和技术可以提供多个步骤的解决方案。

Car-T细胞的表型鉴定

对于Car-T细胞的表型鉴定，在“Car-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点”中提到：所采用的细胞表面标记至少要包括两类 ，一类表面标记应用于检测 Car -T细胞中的非目标成份并限定其比例 ，包括 NK 细胞、单核等 。另 一类表面标记用于鉴别 Car -T细胞中目标 T细胞的比例及不同 T细胞表型的组成， 包括 CD3，CD4 与 CD8 的比例、中央记 忆 T细胞、效应记忆T细胞、效应T细胞以及耗竭 T细胞等对体内效力及持久性的影响， 为最终建立 T细胞表型标准提供数据，同时也为采用表型作生物学效力替代检测提供依据 。对NK细胞、单核细胞及T细胞亚群进行深入分析，需要用到多色流式技术。

ZE5流式细胞分析仪在Car-T细胞表型鉴定中有以下优势：

• 可搭配多达 5 根激光和 30 个检测器，特别适合多色实验
• 经过特别设计的光学平台，可提供高分辨率的数据
• 染料自动匹配和选择，很好的协助多色实验的设计
• 整合了一套通用的平板上样器，可自由切换使用单管、试管架，96 孔和 384 孔板，样本量多的情况下可以大大提高工作效率

MRD监测

微量残留 (minimal residualdisease MRD) 白血病是是指白血病患者按目前的疗效标准 经过治疗取得完全缓解(CompleteRemission，CR)后体内残存微量白血病细胞的状态，对于血液肿瘤的病人，MRD可作为预后评价的敏感指标。

在细胞水平，流式细胞术(FCM )检测具有速度快、操作简便、敏感性高、特异性强等特点，是目前MRD监测的重要手段。ZE5流式细胞仪在MRD监测时具有以下优势，特别适合MRD这种微量目的细胞的检测，可以大大缩短MRD检测时间，提高效率：

• 上样速度快，可达10万个events/秒，缩短单个样本检测时间，提高准确性
• 0电子丢失率，即使在高速下也没有丢失数据
• 单个样本存储量可达1亿个细胞，适合百分含量低的稀有细胞分析
• 可搭配多达 5 根激光和 30 个检测器，适合多色MRD实验

分子水平上，传统的RT-qPCR需要标准品才能进行定量，还存在低表达水平靶标定量不准确、灵敏度不足等问题，这会造成病人错误停止治疗，进而导致疾病的复发。而QX200 ddPCR凭借其更高的灵敏度和准确的绝对定量，对基因突变/融合等肿瘤分子标志物的定量检测可达到MR4.7或更高水平：

• 无需标准曲线和外部参照
• 对PCR效率变化不敏感
• 检测灵敏度更高
• 更高的准确性、精密度和重复性
• 高通量，一次运行可同时分析96个样本

scFv抗体筛选

单链抗体（scFv）是由抗体重、轻链的可变区基因通过一段编码约 5-25 个 AA 的连接肽基因（linker）拼接后表达形成的重组蛋白。用流式分选技术可以将高亲和力、结构稳定的 scFv 抗体筛选出来，速度快且通量高。

S3e流式细胞分选仪体积小巧，操作简单、分选细胞活性高。

• 使用经典的空气激发技术和精准的温控系统，能够在高速分选样本的同时保证灵敏度、高纯度和高活性
• 高度精密的 AutoGimbal 系统结合微马达的精细定位、成像以及软件系统控制，可以自动完成喷嘴和光路流路的校准，无需人工调节光路，大大提高工作效率
• 一体化主机，70cm*65cm*65cm，无需外接液流系统，节约实验室空间

细胞计数和活性检测

Car-T细胞治疗产品的质控需要进行细胞数量以及细胞活率的检测。

TC20自动细胞计数仪可自动进行细胞计数和活性检测，与人工方法比较，可以减少不同操作者的误差，同时带来更好的重复性：

• 凭借创新的自动对焦技术和精密的细胞计数算法，可在30 秒内完成细胞计数，消除主观偏差，生成可靠的数据。
• 通过台盼蓝快速染色，准确检测细胞活力，对细胞存活率进行精确评估
• 双室计数板可以同时计数不同的两个样品或不同稀释度的样品，以得到准确和可重复的细胞计数结果
• 每个计数室仅需要 10 μl 样品，节约珍贵样品

RCR/RCL检测

建立高敏感的RCR / RCL 检测方法是提高Car-T产品安全性的一个重要措施。QX200微滴式数字PCR系统具有高灵敏度、操作简单、快速出具检测结果的特点，可针对特定基因（如VSV-G基因、psi-gag基因或GALV基因），在Car-T细胞生产的整个过程及不同阶段，以及对接受载体转导细胞输注的病人样本进行RCR/RCL检测，以确保无RCR/RCL的污染。

病毒纯化

目前Car-T中用的病毒主要是γ-逆转录病毒载体及慢病毒载体，病毒颗粒相对较大，且有包膜，在培养、 且有包膜，在培养、 纯化 及浓缩 过程中对剪切力相敏感，易破坏细胞的染 过程中对剪切力相敏感，易破坏细胞的染性，因此在进行 纯化及浓缩工艺设计时， 不仅 要考 虑尽可能采用减小这些 破坏 因素的纯化工艺，如控制流速 艺，如控制流速 、减小切向流压力， 而且 还必须要考虑纯化工艺 对 杂质的去除效果以及纯化 规模放大的能力，可采用 柱层析法。

NGC 中高压层析病毒纯化系统是基于NGC中高压层析系列针对病毒、核酸质粒进行优化的纯化系统。适用于基于层析原理的病毒、核酸、核酸复合物的纯化工作。可用于科研以及小规模生产级别的腺病毒相关载体、慢病毒相关载体、多种病毒、质粒、RNA、DNA的纯化。

细胞因子检测

大量Car-T细胞被回输到患者体内后，会引起大量免疫细胞被激活、快速增殖，释放大量的细胞因子，如干扰素、白细胞介素等。这些细胞因子会介导多种免疫反应，引起患者发热、肌痛、低血压、呼吸困难、凝血障碍等炎症反应。细胞因子的释放往往预示着Car-T细胞的活性，但过量的释放引起CRS或神经毒性会对患者造成严重的副作用甚至死亡。对Car-T细胞回输后细胞因子的表达进行持续且高效的监测可以提前判断预后，帮助临床及早制定应对方案，具有重要的临床意义。

Bio-Plex悬液芯片系统具有灵敏度高、数据稳定可靠的特点，仅需少量样本即可检测数十种不同的细胞因子，可高效地监测多种细胞因子水平，帮助判断Car-T细胞疗效，辅助判断预后，同时也可用于新型诊断标志物的研究和筛选。

Bio-Plex悬液芯片系统：

• 不同配置的仪器，可用于不同通量的研究和筛选
• 仅需10ul样本即可得到海量数据
• 通常仅需3小时即可完成实验
• 专利的MCV工具确保数据稳定、可重复
• 超高灵敏度的试剂盒，可检测低至0.1pg/ml靶标浓度
• 最高可达48-plex的all-in-one细胞因子试剂盒